体外受精胚胎移植的实验室工作

　　体外受精胚胎移植过程中要注意什么?南阳不孕不育医院(南阳天伦医院)妇科医师指出，详细、清楚的实验室操作规范是体外受精胚胎移植实验室成功的基础。质控制体系(温度、PH、无菌等控制)是培养系统优化的核心，例如迅速仔细地操作卵或胚胎以尽可能地减少温度、PH等培养条件发生变化。

　　1、贮备。准备受精及胚胎培养所需的受精液、胚胎培养液、冲洗液精子处理液等;根据卵泡数量准备培养皿，培养皿均写好患者姓名、皿号;每个培养皿用培养液冲洗后，加入培养液，放入5%二氧化碳，37℃培养箱内平衡4小时以上。

　　2、检卵。卵泡液及冲洗液收集到无菌试管内，传递至IVF实验室;将混合液轻轻倒人一个大的细胞平皿中，在10倍立体显微镜下观察。大部分的颗粒细胞团块肉眼即可分辨，多被透明质酸紧紧连接。

　　显微镜下辨认卵冠丘复合体;紧紧围绕存卵母细胞周围的颗粒细胞称之为放射冠。将确认的卵冠丘复合体经培养液洗涤后，移到卵细胞培养皿中，置于37℃、5%二氧化碳的培养箱内培养。（推荐阅读：阴道B超引导下卵泡穿刺取卵术）

　　3、受精用精液准备。在超净工作台内进行精液操作;观察精液外观、液化、黏稠度、pH。并取一滴在显微镜下检查镜子密度、形态和活力，记录于病历上;对精液正常者，取1ml液化后的精液，加2ml培养液混匀200g离心10分钟，弃上清，保留沉淀，沿管壁缓慢加入培养液2mI培养液，混匀200g离心10分钟，弃上清沉淀上缓缓加人lml培养液，置37℃、5%二氧化碳培养箱中静置上游30～60分钟，吸取上游液至另一离心管，混匀，计数精子密度、活力，待受精用。

　　4、受精。在取卵4—6小时后进行;如果卵不成熟，受精时间可以延迟数小时受精浓度：每个卵冠丘复合体约(1—2)×105条前向运动精子;根据精子的活动力及形态以及是否有精子聚集现象等调整受精浓度。受精时将合适数目的精子加人到含有COCs的培养皿中，然后放入培箱。

　　5、受精检查。受精后16~20小时检查，机械法去除卵母细胞周围的颗粒细胞，将受精卵移至胚胎培养液微滴中，显微镜下观察，检查每个受精卵的原核数量和极体，记录结果：正常受精卵应该有两个原核，两个极体。将正常受精卵移入新鲜培养液，放回培养箱中。一个原核或多个原核的卵为异常受精。（推荐阅读：体外受精胚胎移植术的实施）

　　6、卵裂检查。受精卵继续培养48小时，检查胚胎发育情况。通常在20倍的倒置显微镜下，观察分裂球的数目、是否均匀以及细胞碎片的多少，并进行评分。通常受精后22～24小时受精卵分裂为2细胞，有时受精后44小时仍为2细胞。受精后36～50小时分裂为4细胞，48—72小时可以观察到8细胞。也可看到3、5或7细胞的胚胎，尤其是在细胞有丝分裂进行中。一般受精后至移植的培养时间为64~68小时。

　　7、胚胎移植。选择3个以下胚胎移植，35岁以下妇女次助孕周期移植胚胎数不得超过2个;一直关内吸入培养液-气体-含有胚胎的培养液-气体-培养液，液体大约为10~20单位;移植后导管内在实体显微镜下冲洗并检查，确定确定无胚胎残留或遗漏;剩余的有发育潜能的胚胎冷洗保存;每位患者在胚胎移植前签署胚胎、未受精卵及精子去向知情同意书;记录进入宫腔情况、移植胚胎数目、术者和移植日期。

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